SignalStar 多重免疫组织化学 (mIHC) 是一种研究 FFPE 组织样品的方法。它使用抗体、寡核苷酸和荧光团来识别存在哪些细胞、它们位于何处以及它们执行哪些功能。
SignalStar 技术使得在维持空间背景和组织结构的同时检测多种表型生物标记物与功能生物标记物成为可能。洞悉这些对了解细胞如何组织并相互作用以影响最终推动疾病进展和治疗反应的组织微环境至关重要。
我们汇总的以下资源可以为您在空间生物学研究中集成 SignalStar 技术提供支持。
SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 提供自动化检测板设计、抗体与荧光团配对以及高效准确的成像轮次。可以编辑检测板构建结果，从而完全控制设计。如果您选择修改检测板，请记住以下注意事项：
蛋白质丰度： 通道 594 和 647 最亮，应该与结合最不丰富抗原的抗体配对。通道 750 的信号强度较低，并且图形构建器将禁止某些抗体与通道 750 配对。
自发荧光： 预计检测组织中低丰度蛋白质的抗体应该位于受自发荧光影响较小的通道中。通道 488 受自发荧光影响最大，应避免用于这些生物标记物。
成像轮次： 虽然无论成像轮次如何，大多数抗体都应该强大且干净，但信号强度可能会受到靶标表达水平低和组织质量差的影响。为了获得最佳结果，针对较低丰度蛋白质的抗体应放置在第一轮成像中，而针对较高丰度标记物的抗体应放置在第二轮成像中。检测板构建器可能禁止在某些成像轮次中使用某些抗体。
成像仪器： 为了避免光谱渗漏，请考虑荧光显微镜的光谱特性。落射荧光显微镜、共聚焦显微镜和扫描荧光显微镜通常可以区分 SignalStar 通道：
| 荧光通道 | 激发光波长 (nm) | 发射光波长 (nm) | 激光线 | 通用滤光器 |
| 488 | 488 | 520 | 488 | FITC |
| 594 | 590 | 618 | 561/594 | Texas Red |
| 647 | 650 | 668 | 594/633 | Cy®5 |
| 750 | 752 | 776 | 633 | Cy®7 |
如果您的最终检测板除了 DAPI 之外还包含所有四 (4) 个荧光信道，那么您需要确认您的荧光成像仪器可以根据这些参数专门检测和分离这些信道。
光谱分解： SignalStar Multiplex IHC Panel 中包含的抗体、试剂和实验步骤均经过优化，可最大程度地减少光谱重叠。为了进一步确保可以区分各个抗体的荧光，我们建议使用用上述通道单独染色的切片创建光谱库。
如果您的成像仪器的特性不适合分离这些荧光信道，则可以使用光谱库通过计算分离荧光信号。
Cell Signaling Technology、CST 和 SignalStar 均是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。Cy 是 GE Healthcare 的注册商标。所有其他商标均属各自所有者专有。访问 cellsignal.com/trademarks 以了解更多信息。
第 10,781,477 号美国专利，外国对应物，以及由此而来的儿童专利。