SignalStar^™ Multiplex IHC 常见问题

问题

• 如何验证 SignalStar Multiplex IHC 试剂盒和试剂？
• 该测定法是否对冷冻组织有效？
• 你们是否有人反应性抗体可提供？
• 你们是否有小鼠反应性抗体可提供？
• 我在你们的可提供抗体菜单中没看到我的目的生物标记物。我还能以某种方式在我的检测板中使用它吗？
• 我能否将此检测中使用的抗体与直接偶联物组合？
• 将我的 SignalStar 染色与序列切片上的显色性染色比较时，我看到更多阳性细胞。我如何知道这种过度染色是否正确？
• 完成染色后我可能等多久才对切片成像？
• 我是否需要针对自己正在使用的组织类型优化 SignalStar 试剂盒和试剂？
• 该测定法中应包括哪种适当的阳性对照？是否需要多个对照？
• 我是否可以使用除实验步骤中提供的方法以外的其他抗原修复方法？
• 我希望对具有高水平自发荧光的脂肪组织、厚脑组织切片或正常肾组织进行该检测。你们是否有任何示例数据可以证明该检测适用于这些组织类型？

回答

如何验证 SignalStar Multiplex IHC 试剂盒和试剂？

CST 彻底验证了 SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 菜单中可提供的每种抗体。通过滴定和荧光团配对以及在两轮成像中测试抗体的各种组合。对各种肿瘤和组织类型进行测试。我们还严格测试了传统显色测定法中使用的亲本抗体，因这些抗体充当这种荧光测定法的基础。我们无法测试所有多重配置或组织。请访问技术支持页面，查找任何其他问题的答案。

该测定法是否对冷冻组织有效？

尚未验证 SignalStar Multiplex IHC 试剂盒与试剂可用于冷冻的组织。我们正在验证我们的抗体和实验步骤是否可用于新鲜组织或冷冻的组织。

你们是否有人反应性抗体可提供？

是的，请在 SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 的第一步中选择“人”，查看我们的人反应性菜单。

你们是否有小鼠反应性抗体可提供？

是的，请在 SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 的第一步中选择“小鼠”，以查看我们的小鼠反应性菜单。

我在你们的可提供抗体菜单中没看到我的目的生物标记物。我还能以某种方式在我的检测板中使用它吗？

尚未验证 SignalStar Multiplex IHC 试剂盒和试剂可配合我公司菜单以外的抗体使用。我们正在开发诸多定制解决方案以便在 SignalStar 测定法中使用您的自有抗体。

SignalStar mIHC 是一种无损技术。因此，为了使用目的抗体，您可以在 SignalStar 检测后对同一组织进行直接免疫荧光分析。SignalStar™ Fluorescence Removal Kit #32722 可让您在 SignalStar mIHC 后去除荧光寡核苷酸，以便对直接免疫荧光进行染色和可视化。

我能否将此检测中使用的抗体与直接偶联物组合？

尚未验证 SignalStar Multiplex IHC 试剂盒和试剂可与直接偶联物联合使用。SignalStar™ Fluorescence Removal Kit #32722 可让您在 SignalStar mIHC 后去除荧光寡核苷酸，以便对直接免疫荧光进行染色和可视化。我们发现，许多针对强细胞表面标记物的直接偶联物以这种方式使用时效果很好。请参阅我们最近的海报，以了解更多信息。此外，请参阅我们用于直接免疫荧光成像的直接偶联抗体系列。

将我的 SignalStar 染色与序列切片上的显色性染色比较时，我看到更多阳性细胞。我如何知道这种过度染色是否正确？

在优化期间，我们发现荧光染色可能显示比显色性染色更高的阳性百分比。为确保任何过度染色为特异性，请确认用其他染色剂证明亚细胞定位和共定位正确。例如，如果所有 CD8^＋ 细胞都为 CD3^＋，则任何与显色性染色相比的 CD8^＋过度染色很可能是正确的。

完成染色后我可能等多久才对切片成像？

对于第 1 轮成像，在完成染色后 8 小时内成像时，染色应显示稳定信号。对于第 2 轮成像，成像应尽可能接近于染色完成时进行，但是应当保持稳定长达 8 小时。

我是否需要针对自己正在使用的组织类型优化 SignalStar 试剂盒和试剂？

SignalStar Multiplex IHC 试剂盒和试剂已针对抗体的荧光团配对和顺序作了优化。由于组织在生物标记物的质量和表达水平方面不同，将您的检验组合中抗体的浓度升高 2 倍或降低 0.5 倍可能有助在您的实验中实现最佳信号。

该测定法中应包括哪种适当的阳性对照？是否需要多个对照？

通过显色性 IHC 证明每个标记物呈阳性的任何组织都可以充当阳性对照组织。因此，每个靶标都将要求阳性对照，这有时可能导致多个对照必不可少。为了最佳比较，各切片应尽可能连续。

我是否可以使用除实验步骤中提供的方法以外的其他抗原修复方法？

为了获得最佳效果，我们不建议偏离 SignalStar 实验步骤。但如果您无法使用实验步骤中详述的抗原修复方法，您可以尝试使用微波炉，不过它已被证明会导致荧光信号减弱。我们不建议在检测低丰度标记物时使用微波炉，并且无法保证使用此替代方法的结果。

使用微波炉进行抗原修复：

1. 要配制 250 ml 1X EDTA Unmasking Solution，将 25 ml SignalStain^® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747) 用 225 ml dH₂O 稀释。
2. 将载玻片浸入装有 1X EDTA 修复液的容器中，放入微波炉中加热直至沸腾（功率级别 10 下约 2.5 分钟）。
3. 随后在亚沸温度 (95°-98°C) 下煮沸 15 分钟。在大多数微波炉中，这相当于在功率等级 3 下加热 8 分钟，然后在功率等级 2 下加热 7 分钟。
4. 从微波炉中取出载玻片容器，并置于 dH ₂O 水龙头下。向载玻片容器直接添加水，持续 5 分钟，直至所有 EDTA 均由 dH₂O 替换为止。无需冷却。

我希望在具有高水平自发荧光的脂肪组织/大脑/正常肾脏组织上进行这项检测。你们是否可以提供任何示例数据以证明该检测方法适用于这种组织类型？

虽然我们在优化过程中使用了各种肿瘤和组织类型，但我们无法考虑所有组织和表达水平。假设遵循了我们推荐的实验步骤，该检测应适用于厚度为 4-5 µM 的 FFPE 组织。此外，由于该检测方法具有高水平的扩增，即使非常高的自发荧光水平也可通过产生强烈的特异性信号来克服。

技术支持

访问技术支持页面，搜索 SignalStar 相关的疑难问题解答信息和技术问题的答案。

Cell Signaling Technology、CST 和 SignalStar 均是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。所有其他商标均属各自所有者专有。访问 cellsignal.com/trademarks 以了解更多信息。

第 10,781,477 号美国专利，外国对应物，以及由此而来的儿童专利。