间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 和 c-ros 癌基因 1 (ROS1) 是相关的受体酪氨酸激酶 (RTK)。研究发现，ALK 和 ROS 是在各种癌细胞中表达的突变羧基末端融合蛋白 (1-10)。表 1 列出了一些已检测到的 ALK 和 ROS1 融合伴侣以及相关的癌症类型。
| RTK | 抑制剂 | 融合伴侣 | 相关癌症 |
|---|---|---|---|
| ALK | Crizotinib5 | EML42,11、TFG1、KIF5B6、NPM7 | NSCLC1,2、ALCL7、CRC11 |
| ROS1 | Crizotinib5 | FIG8、CD749、SLC34A29,11 | 恶性胶质瘤8、胆管癌10、卵巢癌3、NSCLC1,4、CRC11 |
表 1. ALK 和 ROS1 融合伴侣以及相关癌症的汇总表。缩略语： ALCL = 间变性大细胞淋巴瘤；EML4 = 棘皮动物微管相关蛋白样 4；NPM = 核仁磷蛋白；NSCLC = 非小细胞肺癌；TFG = TRK 融合基因
Cell Signaling Technology 建议使用两种高度敏感的抗体来检测 ALK 和 ROS1 全长蛋白及羧基末端融合蛋白。
使用 ROS1 (D4D6) Rabbit mAb #3287 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。注：对 FIG-ROS1 融合蛋白进行染色 (4)。
使用 ROS1 (D4D6) Rabbit mAb #3287（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对 HCC78 (SLC34A2-ROS1)、U-118 MG (FIG-ROS1) 和 HeLa（ROS1 阴性）细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。注：HCC78 细胞表达 85、70 和 59 kDa 形式的 SLC34A2-ROS1 融合蛋白 (1)。
使用 ALK (D5F3) XP® Rabbit mAb #3633 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
使用 ALK (D5F3) XP® Rabbit mAb #3633 对 NCI-H2228 和 NCI-H3122 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。有必要显示融合不同 EML4 外显子（v1 或 v3）的变体。
CST 使用 PTMScan® 技术对肺癌细胞中的酪氨酸激酶活性进行了一次大规模的无偏调查。Cell Signaling Technology(11) 开发的这项专有技术利用 CST™ 基序抗体和 LC 串联质谱法，抗体用于对消化细胞提取物的肽进行免疫亲和纯化，质谱法用来检测和定量磷酸化、乙酰化或泛素化等翻译后修饰所发生的变化。对于这项研究中，我们使用磷酸化酪氨酸基序抗体，来分析 NSCLC 细胞系和组织中蛋白酶体内的磷酸化变化。
通过使用 PTMScan® 技术，我们调查了 41 种 NSCLC 细胞系和 150 余种 NSCLC 肿瘤细胞中受体酪氨酸激酶 (RTK) 和非受体酪氨酸激酶的磷酸化酪氨酸状态。我们发现 50 余种酪氨酸激酶和 2,500 余种下游底物在 NSCLC 生长和进展中发挥作用。这项研究的两个非常令人激动的发现为：在某些 NSCLC 细胞系和肿瘤细胞中检测到新的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 和 c-ros 癌基因 1 (ROS1) 羧基末端融合蛋白。
对 ALK 和 ROS1 具有特异性的兔单克隆抗体 [ALK (D5F3) XP® 兔单克隆抗体 #3633；ROS1 (D4D6) 兔单克隆抗体 #3287] 已被开发用来检测全长和羧基末端融合蛋白。这些抗体已经 IHC 验证，并且可检测 NSCLC 样品中的 ALK 和 ROS1 融合蛋白表达 （12、4）。
使用 ROS1 (D4D6) Rabbit mAb #3287 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行 IHC 分析。注：对 FIG-ROS1 融合蛋白进行染色 (4)。
CST 与 Pfizer, Inc.（ALK 抑制剂 crizotinib 的制造商）和 Ventana Medical Systems, Inc.（配套诊断检测的领先供应商）建立了合作伙伴关系，以共同开发在自动化诊断 IHC 筛选测定法中使用的 ALK (D5F3) XP® 兔单克隆抗体，这种抗体可检测 NSCLC 患者样品中的 ALK 融合蛋白。
ALK 表达染色呈阳性的患者样品可能成为 crizotinib 候选适用人，其中，crizotinib 于 2011 年 8 月在美国获批使用。
使用 ALK (D5F3) XP® Rabbit mAb #3633 对高水平（上图）与低水平（下图）ALK 表达的石蜡包埋的人肺癌细胞进行 IHC 分析。
CST 科学家用粗体显示。