通过免疫组织化学法 (IHC) 了解组织中的蛋白表达

检测和分析蛋白表达

什么是免疫组织化学 (IHC)？

免疫组织化学 (IHC) 涉及使用特异性一抗对组织样品中的细胞蛋白进行标记，并使用检测试剂可视化靶标。可以使用 IHC 通过显色法检测或荧光检测评估蛋白质表达。两种检测体系均依赖于一抗介导的抗原识别。显色 IHC 利用酶催化色原在抗原位置处的沉积，而荧光 IHC 利用荧光基团通过直接或间接免疫荧光法来辅助可视化关注抗原。

两种检测系统均揭示了等同的蛋白质水平和分布细节。因此，检测方法的选择完全取决于实验目标。

何时选择 IHC？

IHC 常用于确认肿瘤或其他组织癌变的形态特征。在保持原组织成份、细胞特征以及结构的情况下，IHC 利用抗体检测和分析蛋白质表达。

在 CST，专门从事 IHC 的科学家们检测了大量抗体，并只推荐了最适合该应用的抗体 — 以确保您的检测能够首次成功，且每次都是如此。

在设计 IHC 实验时，您应考虑哪些变量？

在 CST ，专门从事 IHC 的科学家们检测了大量的抗体，并只推荐了最适合该应用的抗体。我们的科学家对多种抗原修复和免疫染色方法进行了检测，以确定 IHC 中各抗体在 IHC 中的最佳使用条件。此外，科学家还研制了 IHC 配套试剂，以加强抗原的检测和提高 IHC 实验步骤的效率。

因为固定时形成的交联可通过阻止抗体与抗原接触来防止抗体结合；因此，通过称为抗原修复的过程来解交联很重要。抗原修复可通过热诱导的方法或者酶解法实现。产品数据表中将明确阐述用于 CST 抗体的推荐方法。

一抗在任何 IHC 测定中都至关重要，对数据质量存在直接影响。质量较差的一抗可导致结果无法解释或存在误解。对于批准用于 IHC 的抗体，需要在单一组织样品超过一次染色阳性。抗体应通过严格的检测过程，以确保其可精确地检测到靶标。

对您的抗体使用效果最优的试剂和实验步骤能够大大改善您的实验结果。

您还必须确保检测到的信号是特异性的。在任何实验中，我们都应考虑包含适当的对照。阳性和阴性对照可为您确定自己的抗体正在检测预定靶标注入信心。

使用 IHC 有哪些挑战？

调整相对较少的变量通常即可解决欠佳的 IHC 染色。调整实验步骤内的关键步骤（如抗原修复）通常可解决这些常见问题（如信号微弱或无信号以及高背景）。

联系我们的高级技术支持团队以回答您有关测定法的问题，包括如下方面的详细信息：

• IHC 验证
• IHC 测定法疑难解答
• Leica BOND 自动染色仪实验步骤开发
• 多重 IHC 测定法实验步骤和疑难解答

使用经验证的 IHC 抗体获得一致的结果

一抗在任何 IHC 测定中都至关重要，对数据质量有直接影响。在 IHC 分析中确定靶标特异性需要多个验证步骤。CST 提供使用福尔马林固定石蜡包埋的 (FFPE) 组织进行严格 IHC 验证的700重组单克隆抗体。内部验证可以让我们的科学家为您提供专家建议，以节省您的时间并加快您获得结果的速度。我们广泛的验证确保我们的所有经 IHC-P 验证的抗体还可用于荧光多重 IHC。

CST 的科学家们视情况使用各种方法来验证每种建议的 IHC 抗体，可确保您使用每种抗体观察到的染色均具有特异性。验证步骤包括：

• 进行蛋白质印迹法分析，以通过最小交叉反应条带证实分子量正确。
• 使用已知靶标表达水平的石蜡包埋的细胞沉淀物来验证靶标特异性。
• 在相关的癌症模型中评估抗体性能，包括但不限于人癌组织阵列、小鼠模型和来自有已知靶标表达水平的细胞系的异种移植物。
• 对组织切片和细胞沉淀物进行磷酸酶处理，以验证靶标磷酸化特异性。
• 封闭肽可验证特异性，并排除 Fc 介导的结合和其他非特异性染色。
• 彻底的批次检测可确保获得准确 IHC 结果所需的可重复性。
• 预先决定和指定稀释度和实验步骤；也提供对照试剂。

通过抗体特异性配套产品和对照加速优化

抗体只是实验成功的因素之一。对您的抗体使用效果最优的试剂和实验步骤能够大大改善您的实验结果。为了提高您的 ICH 实验步骤开发和效率和确保您的检测成功，我们的科学家对多种抗原修复和免疫染色方法进行了检测，以确定 IHC 中各抗体的最佳使用条件。我们开发配套试剂以增强抗原检测，从而改善您的结果。