ELISA 有多种常用方法类型。根据生物学问题、可用的结合物以及检测方法，会使用这些方法的多种其他衍生方法。
直接 ELISA 与其他 ELISA 方法不同，因为抗原与微孔板的孔直接结合，而且直接偶联检测（或结合）抗体，相比之下，间接 ELISA 中使用一种偶联二抗。
简单地说，抗原包被和固定到微孔板表面后，添加一种封闭剂来防止检测抗体出现非特异性结合。接下来，将一种直接偶联某种酶（例如 HRP）的检测抗体添加到孔中，随后添加该酶的一种底物。短暂孵育并添加停止液后，用读板机测定信号。
直接 ELISA 检测具有最简单的整体设置。
ELISA 直接检测
虽然与直接 ELISA 类似，但间接 ELISA 使用一种偶联二抗检测结合抗体。
总的来说，遵循直接 ELISA 的前几个步骤，包括固定和封闭。添加一种检测抗体，但与直接 ELISA 不同，该抗体未偶联。然后添加第二抗体（与酶偶联）来检测第一结合抗体。在添加一种底物和停止液前，进行另一个洗涤步骤。然后使用一个读板机检测信号。
使用一种第二或第二/第三抗体进行检测不仅会导致信号扩增，还会导致流程变长、更耗时且更复杂。
ELISA 间接检测
在夹心 ELISA 中，将捕获抗体吸附在 ELISA 平板上，这与抗原相反。此外，两种抗体（一种是捕获抗体和另一种是检测抗体），因此形成一个像“夹心结构”的复合体。
简单地说，在清洗和封闭固定的捕获抗体后，将含有抗原的样品添加到微孔板上。添加一种会结合样品分子其他区域的检测抗体。这种抗体可直接偶联酶。如果未偶联，则使用一种第二抗体（与酶偶联）检测第一结合抗体。清洗孔后，添加该酶的底物，然后进行短暂的孵育并添加停止液。通常在一个读板机上测定每个孔的信号。
在 CST，我们提供多种类型的夹心检测试剂盒，包括 PathScan®（一种传统固相 ELISA 形式）和 FastScan™（一种基于溶液的 ELISA 检测形式）。虽然每种技术都为夹心检测形式，但后者能更快地生成结果，且步骤和洗涤次数更少。这是因为会产生一个夹心复合体（由抗体和分析物组成），并且随后用亲和力标签将溶液中的分析物固定在平板上。了解更多有关哪种类型更适合您的信息。
比较 Pathscan 和 FastScan ELISA 抗体-CaptSure
竞争性 ELISA（也称抑制或封闭 ELISA）通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量。
可通过两种方式进行竞争性 ELISA：微孔板可用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被。可添加一种有部分某种检测（例如一种偶联的荧光染料）的靶标分析物，以竞争结合抗体上的位点。结合量较低表明样品中的靶标分析物含量高。
信号与分析物含量呈负相关，因此，如果靶标分析物的浓度高，则分析物竞争性结合有限量的标记抗体，从而使参考信号减弱。
| 优点 | 缺点 | |
|---|---|---|
| 直接 | 整体检测设置简单 | 用于检测的每种抗体必须偶联 |
| 测量样品中抗体量的理想形式 | 可能产生更强的背景信号，因为包被抗原会非特异性地结合表面，而且可能会以一种非原生构型呈递给抗体 | |
| 不能用于多重检测 | ||
| 间接 | 灵敏度比直接 ELISA 高 | 由于步骤数量较多，实验步骤通常耗时长，且更容易出错 |
| 可使用偶联的第二抗体进行多次检测（前提是使用相同的结合抗体物种进行所有不同的检测）；划算 | 可能增强非特异性结合和背景信号，因为所需试剂数量更多 | |
| 第二抗体将会使信号扩增 | ||
| 夹心 | 一般来说，更具有特异性，因为该检测需要两种抗体检测目标分析物 | 匹配抗体对的开发可能成本高昂，并且耗时 |
| 竞争性 | 用于对含有低分析物浓度的样品进行定量测定 | |
| 用于检测免疫应答 |
多重 ELISA 可让研究人员一次性评估多个蛋白靶标的水平，它通常用于同时测定多个细胞因子的表达。与传统 ELISA 形式不同，多重 ELISA 方法采用以下一种或多种技术：流式细胞术、荧光、化学发光或电化学发光法。
流式细胞分析是最常用的多重 ELISA 方法，并使用珠子偶联抗体进行。通常，与其他方法相比，使用流式细胞术和珠子偶联抗体可以一次性测定更多细胞因子。