在 ELISA 中准确测量抗体与抗原的结合将取决于抗体对抗原的特异性。抗体特异性较差会导致高度非特异性的背景。相比之下，特异但微弱的结合可能被洗掉，导致不真实的低信号。因此，必须选择合适的抗体，才能在检测中避免这些问题以及抗体之间的交叉反应性。
夹心 ELISA 需要两种抗体：一种用于捕获，另一种用于检测。它们通常被称为一个“匹配对”。在多数情况下，夹心检测更具特异性，因为这种检测需要 2 种抗体来检测目的靶标。
CST 提供已检测到优化抗体对的 ELISA 试剂盒，从而为每次实验提供可靠且可重复的数据。
使用适当的缓冲液将一种特定抗体或抗原包被在 ELISA 平板上。被动吸附需要对条件进行优化，因为它们受多种因素影响，包括塑料的表面化学、温度、包被缓冲液的 pH、抗原/抗体浓度和时间。
典型的包被缓冲液包括磷酸盐缓冲盐水 (PBS)、碳酸氢钠或类似缓冲液，但应测试和优化这些条件。重要的是，包被缓冲液不应含有会竞争地结合抗原或抗体的蛋白。
抗原捕获的方法将取决于所选的 ELISA 类型：
在用抗体检测分析物之后，将底物添加到孔中。抗体酶偶联物会与底物发生反应，产生一种比色、化学发光或荧光信号。通常用一个微孔读板机上测定产生的信号。
可更改孵育时间和温度，以产生最佳信噪比。