Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
41776S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
小鼠
使用与小鼠颗粒酶 F 蛋白的 Gln197 周围残基相对应的合成肽,对动物免疫接种来产生单克隆抗体。
粒酶属于由细胞毒 T 淋巴细胞和天然杀伤 (NK) 细胞表达的丝氨酸蛋白酶家族,并且是对病原体和转化细胞作出免疫应答的关键组分 (1)。在小鼠中,已鉴定出十个家族成员:A、B、C、D、E、F、G、K、M 和 N (2)。粒酶作为酶原被合成并且通过剪切前导序列加工为成熟酶。它们通过胞吐作用释放于含有穿孔素(一种膜孔形成蛋白)的溶酶体样颗粒中 (3)。颗粒酶 F 诱导一种新的细胞死亡通路,该通路由磷脂酰丝氨酸 (PS) 的外化、核浓缩、线粒体损伤、细胞色素 c 释放、单链 DNA 切刻和胱天蛋白酶失活组成 (4)。来自颗粒酶 F 和 C 表达减少的小鼠的 CTL 显示细胞毒性削弱 (5)。
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