流式细胞术活细胞实验步骤

重要事项：请参阅产品网页上的产品专用流式细胞术实验步骤，以确认其是否可与活细胞一起使用，并了解抗体稀释比例建议。

A. 溶液与试剂

注：利用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

1. 1X 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：配制 1 L 的 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 至 900 ml 水，然后将其混合。
2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。
3. 推荐的二抗：要检测未偶联的抗体，请选择与您的一抗（例如兔）的宿主物种匹配的二抗。点击此处以获取被批准用于流式细胞术的二抗的最新列表。

注：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品页，了解建议的实验步骤。访问我们的列表，了解经流式细胞术验证的细胞染料列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注：如果使用全血，则需在免疫染色之前裂解红细胞并通过离心分离来洗涤。

注：为防止人 Fc 受体与兔 IgG 或小鼠 Fc 受体与兔或小鼠 IgG 结合，在免疫染色前用 Fc 块预孵育活细胞。

注：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。（通常，每次检测用 5x10⁵ 至 1x10⁶ 个细胞）。
2. 通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。
3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
5. 在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。弃去上清液。重复。如果使用直接偶联抗体，则跳到步骤 9。
6. 在 100 µl 稀释的荧光物质偶联的二抗（按建议稀释度用抗体稀释缓冲液制备）中重悬细胞。
7. 在冰上孵育 30 分钟。避光。
8. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
9. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。