流式细胞术技术支持

为了确保及时地获取解决方案，请在联系我们时准备好以下信息。

请提供以下信息

1. 您正在使用哪种 CST 抗体（靶标、稀释度、批号和参考日期）？您正在使用哪种二抗（供应商、荧光物质、稀释度）？
2. 您之前是否成功使用过这种二抗？
3. 您正在使用哪种类型的细胞（全血、PBMC、细胞系、骨髓细胞、分离组织...）？
4. 简要描述固定/通透实验步骤（尤其是，您是否使用甲醇来通透，或使用试剂盒？）。
5. 您是否同时需要使用其他标记物/设门抗体（CD45、细胞角蛋白等）？
6. 如何刺激/抑制这些细胞？（请在您的答案中解决以下问题）
   1. 您是否确定这些细胞中存在靶标？
   2. 如果您正在使用某种磷酸化抗体，那么该实验步骤是否经证实会影响该靶标的磷酸化？
   3. 您是否有阳性/阴性对照（血清饥饿、特异性抑制剂、激活的配体等）？
7. 细胞处理后与固定前之间相差多长时间？

没有信号的主要原因

• 使用了错误激光/含荧光物质的 PMT。
• 固定和通透不充分（针对胞内抗原的多数抗体不适合用于商业固定和通透试剂盒，这些试剂盒使用去垢剂进行通透）。
• 刺激并未诱导所需靶标的磷酸化。
• 靶标被去磷酸化（刺激和固定之间等待了太长时间，如固定前用 CD 孵育）。