与蛋白质印迹分析相比时,胞内流式细胞术可以为信号转导事件研究提供独特的优势。蛋白质印迹法检测来自汇集的细胞群体的蛋白质水平,因此其灵敏度可能不足以识别罕见信号转导事件,特别是低比例特化细胞中发生的事件。这可能错误解读为阴性结果。由于流式细胞术具有在单个细胞水平测量事件的能力,因此它可以识别罕见的信号转导事件(参见下文例子)。
胞质非受体酪氨酸激酶 Syk 传输来自 B 细胞受体 (BCR) 的信号,并且当 B 细胞受体激活时被磷酸化。
使用 WB 研究未处理的或用 Ig M (10μg/ml) 处理 10 分钟的 PBMC 群体中 Syk 的激活情况。两个组使用 Syk Antibody #2712 通过 WB 对总 Syk 进行分析后,都显示了分子量正确的两个条带。但是,使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) rabbit mAb #2710 对磷酸化 Syk 的探测未产生可见条带。Syk 仅在 PBMC 内部的 B 淋巴细胞群体中表达,并且处理后,仅小比例的 B 细胞将显示 Syk 的激活。因此,IgM 处理的影响在蛋白质裂解物内部被削弱,并且使用 WB 进行分析时不可检出。
当通过流式细胞术进行相同分析时,分别用 CD19 细胞和 CD4 细胞、B 细胞和 T 细胞特异性标志物共染色,可以鉴定 B 细胞。可以检查 CD19 阳性和 CD4 阴性 B 细胞的 Syk 磷酸化情况。正如预期的一样,未处理的细胞中不存在 Syk 激活。然而在 IgM 处理后,约 10% 的 B 细胞变成 phospho-Syk 阳性。因此不同于蛋白质印迹法,流式细胞术有能力从不均一的人 PBMC 汇集物中鉴定并且拆分这个微小但真实的 B 淋巴细胞亚群。
CyTOF® 质谱流式细胞术单细胞蛋白质组学平台使用金属偶联的抗体以同时表征单个细胞内部超过 30 种蛋白质。
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