Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
36046S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk Mi Dm Z Pg |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴, 貂 , 黑腹果蝇 , 斑马鱼 , 猪
使用与人 p44 MAP 激酶的 Thr202/Tyr204 周围的残基相对应的合成磷酸肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
丝裂原活化蛋白激酶 (MAPKs) 是参与多个细胞程序(如细胞增殖,分化、运动和死亡)的广泛保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。p44/42 MAPK (Erk1/2) 信号转导通路可以响应于一系列多样的胞外刺激(包括促分裂原、生长因子和细胞因子)被激活 (1-3),并且研究人员认定它是癌症诊断和治疗的重要靶标 (4)。在受到刺激的情况下,一个连续的蛋白激酶三级联反应被启动,该级联由 MAP 激酶激酶激酶(MAPKKK 或 MAP3K)、MAP 激酶激酶(MAPKK 或 MAP2K)和 MAP 激酶 (MAPK) 组成。已经鉴定出多种 p44/42 MAP3K,包括 Raf 家族成员,以及 Mos 和 Tpl2/COT。MEK1 和 MEK2 是这个通路中的主要 MAPKK (5,6)。MEK1 和 MEK2 通过分别使活化环残基 Thr202/Tyr204 和 Thr185/Tyr187 磷酸化,从而激活 p44 和 p42。已经鉴定出 p44/42 的几种下游靶标,包括 p90RSK (7) 和转录因子 Elk-1 (8,9)。p44/42 受双特异性 (Thr/Tyr) MAPK 磷酸酶家族(称作 DUSP 或 MKP) (10) 以及 MEK 抑制剂(如 U0126 和 PD98059)的负向调控。
探索与本品相关的通路。
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