Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
44673S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人
使用与人 NF-κB p65 蛋白的 Ser529 周围残基相对应的合成磷酸肽,对动物免疫接种来产生单克隆抗体。
核转录因子 κB (NF-κB)/Rel 家族的转录因子,在炎症和免疫应答中发挥重要作用 (1,2)。哺乳动物中有五个家族成员:RelA、c-Rel、RelB、NF-κB1 (p105/p50) 和 NF-κB2 (p100/p52)。p105 和 p100 都可由蛋白酶体经蛋白水解处理后,分别产生 p50 和 p52。Rel 蛋白结合 p50 和 p52 形成二聚体,二聚体再结合 DNA,调节转录活动。未刺激细胞中 NF-κB 被 IκB 抑制性蛋白阻隔在细胞浆中 (3-5)。NF-κB 活化剂可诱导 IκB 蛋白的磷酸化,并通过泛素-蛋白酶体通路将其靶标进行快速降解,释放 NF-κB 进入胞核,使其调节基因表达 (6-8)。NIK 和 IKKα (IKK1) 可调节 NF-κB2 (p100) 的磷酸化和加工以产生 p52,后者再转位入胞核 (9-11)。
NF-κB p65 被酪蛋白激酶 II 磷酸化后发生在细胞因子诱导的 NF-κB 和 IκB 解离后,例如 TNF-α (12)。
探索与本品相关的通路。
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